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SMM CHO-SI,推荐用于普通CHO稳定株的培养以及蛋白表达

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    产品描述
    SMM CHO-SI 培养基主要是为提高CHO稳定株的蛋白产量而开发的,无血清,无动物源成分的培养基。不含L-谷氨酰胺,使用时需加入4mM的L-谷氨酰胺。不含HT。
    产品特点
    蛋白表达量高,细胞生长好,严格的质控,批次稳定性好。
    产品用途
    仅用于科学研究,不推荐用于人类或动物的诊断和治疗。
    储存条件

    2-8℃避光储存12个月。

    产品使用效果
    义翘高效表达载体、CHO细胞稳定表达专用培养基( SMM CHO-SI)以及专用添加剂( SMS CHO-SUPI)联合使用条件下,CHO 细胞能实现人重组蛋白的高效表达(~3.5g/L)。

    培养方法

    (一)细胞复苏

    1.取出冻存管,迅速在37℃水浴锅里融化,整个过程最好控制在1分钟以内。

    2. 轻轻地混匀细胞并全部移到50ml的离心管中,逐滴加入 5-8ml在37℃水浴锅里预热的新鲜培养基。100g,5min离心细胞。

    3. 倒掉上清,用10-20ml在37℃水浴锅里预热好的新鲜培养基重悬细胞,放到100ml培养瓶中。然后将细胞放到37℃,5%的CO2恒温摇床中,110-175rpm培养。

    4. 2-5天后取样计数细胞密度和活率,如果细胞密度达到1.0X106cells/ml,则进行正常传代培养;如果细胞密度低于1.0X106cells/m,则收集细胞进行离心处理,100g,5min。然后重悬到20-30ml已经在37℃水浴锅里孵育好的新鲜培养基,继续培养。

    5. 细胞生长正常后,传代时起始密度控制在0.3X106cells/ml ,3-4天传一次代。

    注意事项:冻存管融化速度越快越好;由于刚复苏的细胞比较脆弱,所以整个过程要轻以免损伤细胞。

    (二)细胞传代

    1. 取样计数细胞,计算细胞密度。

    2. 按照起始细胞密度0.3-0.4X106cells/ml,计算所需细胞悬液和培养基的用量传代,100ml的培养瓶中放15-20ml培养(或250ml的培养瓶放50-60ml培养)。37℃恒温培养箱中培养,5%CO2,摇床转速:110-175rpm。

    3. 每3-4天传一次代,起始细胞密度传到0.2-0.3X106cells/ml。

    如何使 CHO稳定株细胞适应SMM CHO-SI培养基:

    通常情况下,细胞不经过驯化而能直接适应SMM CHO-SI培养基,下面我们推荐2种方式来更换培养基:1)直接更换;2)逐步更换。首先选用的细胞要在对数生长期,同时细胞活率大于90%。

    (三)直接更换

    1. 细胞培养在加5-10%血清传统的培养基或其他无血清培养基里,直接稀释传代到SMM CHO-SI培养基,细胞密度控制在0.3-0.4X106cells/ml。

    2.然后放入5%CO2、37℃的恒温培养箱中,110-175rpm转速条件下培养。

    3. 3-5天后进行传代或者换液。

    4. 继续传代培养,起始细胞密度控制在0.3-0.4X106cells/ml,直到完全适应SMM CHO-SI培养基。

    5. 经过几代在100%的 SMM CHO-SI培养基中培养,传代后4-6天细胞的密度可以达到2-3X106cells/ml,细胞活率大于90%。这时说明细胞已经完全适应SMM CHO-SI培养基。

    注意: 如果直接更换没有成功,则进行逐步更换的方法。

    (四)逐步更换

    1.细胞培养在加5-10%血清传统的培养基或其他无血清培养基里,稀释传代,细胞密度控制在0.3-0.4X106cells/ml,原培养基与SMM CHO-SI培养基的比例为75:25。

    2.然后放入5%CO2、37℃的恒温培养箱中,110-175rpm。

    3. 3-5天后进行传代,如果细胞生长正常,则传代时原培养基与SMM CHO-SI培养基的比例为50:50. 细胞密度仍控制在0.3-0.4X106cells/ml。

    4. 重复步骤3逐步增加SMM CHO-SI培养基的比例(原培养基与SMM CHO S I培养基的比例为25:75;10:90)直到100%的SMM CHO-SI培养基。

    5.在100%的SMM CHO-SI培养基中,传代后4-6天细胞的密度可以达到2-3X106cells/ml,细胞活率大于90%。这时说明细胞已经完全适应SMM CHO-SI培养基。

    (五)冻存细胞

    冻存细胞时CHO cells 要处在对数生长期同时细胞活率在90%以上。

    1.取样计数细胞,根据冻存管数计算所用细胞悬液体积和冻存液的体积,比例如下:92.5%的培养基混合物(50% 的新鲜SMM CHO-SI培养基+50% 条件SMM CHO-SI培养基 )+ 7.5% DMSO,最终的细胞数为 5 x 106cells/ 管。

    2.准备相应体积的冻存培养基:46.25% 的新鲜SMM CHO-SI培养基 + 7.5% DMSO,放在4°C 备用。冻存培养基最好为当天配制。

    3.通过100g,5-10min离心收集细胞,留46.25%条件培养基重悬细胞,然后逐滴加入事先准备好的放4°C 的冻存培养基。

    4.混合均匀后分装细胞到冻存管中,一般2ml的冻存管放1-1.5ml,贴好标签。

    5.然后放到冻存盒中,放入-80°C 冰箱(每分钟下降1°C)。

    6.80℃冰箱中过夜放置(至少放置24小时),转移细胞到液氮罐中,推荐储存条件在-125°C to -200°C。

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    Catalog: MCHOSI-1
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