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SMM293-T1,推荐用于HEK293细胞的瞬时转染、细胞培养以及重组蛋白质的表达

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产品描述:
SMM 293-T1培养基适用于贴壁、悬浮培养条件下的HEK293家族的HEK293EBNA及相关的细胞(如HEK293-F、HEK293H 、HEK293T、HEK293S、HEK293FT)的长期生长和瞬时转染。

SMM 293-T1含有细胞生长所需的全部营养成份,无需添加任何添加物即可使用。其化学成分明确,主要包含细胞生长所需的无机盐, HEPES, 碳酸氢钠, 必需和非必需氨基酸, 维生素, 酚红, 微量元素, PluronicÒ F-68和其他无机物(注意:此培养基不包含抗生素以及血清)。
产品特点:
• HEK293细胞瞬时转染专用培养基 • 即用型完全培养基,不用添加其他组分
• 培养基批次间性能稳定,同类产品性能更优越 • 无动物源组分,无血清,化学成分明确
• 转染前后无需更换培养基 • 上千蛋白表达成功案例
• 适用于瞬时转染和稳定株转染以及培养 • 适用于细胞的悬浮培养和大规模的反应器培养
产品参数:
外观 澄清红色溶液 适用细胞株 HEK293EBNA及相关的细胞(如HEK293F、HEK293T、HEK293H 、HEK293S、HEK293FT)
渗透压 275±10 mOsm/kg 细胞接种密度 0.3-0.6×106 cells/mL
pH值 6.0–6.5 倍增时间 < 26 hrs(因细胞类型、状态影响而存在数值变化)
无菌检测 无菌 细胞培养评价 优良
内毒素 < 10 EU/mL 产品用途 仅用于科学研究,不推荐用于人类或动物的诊断和治疗
有效期 12个月 储存条件 2-8 ℃,避光
SMM 293-T1培养基为澄清红色透明液体,2~8℃避光保存,如发现培养基变得浑浊或出现沉淀,请勿使用。
产品使用效果:
细胞密度高
SMM 293-T1培养基在HEK293T 的培养上更具优势。下图从细胞生长曲线以及细胞活率两个方面,展示了四种培养基对HEK293T细胞的培养效果,SMM 293-T1培养基明显具有不亚于国外著名品牌的质量。
cell-culture-in-SMM-293-T1
成功表达多种重组蛋白质
SMM 293-T1 成功应用于多种重组蛋白质的表达生产,获得上千个高品质的蛋白质产品。其中一种Fc标签融合蛋白的产量高达2.5g/L。
protein-production-in-SMM-293-T1
产品使用方法:
细胞复苏:
  1. 迅速取出冻存的细胞,在37 ℃水浴条件下进行解冻(可以在水中轻轻晃动,时间控制在30s以内);
  2. 轻轻地混匀细胞并将融化的细胞全部移至50 mL无菌离心管中,逐滴加入10 mL预热到37℃的培养基,离心换液(100 g,3 min)去除全部上清,加入293新鲜培养基重悬,使得细胞密度达到0.4~0.6×106cells/mL;
  3. 将细胞置于37℃,5%CO2,转速为110~175rpm的恒温摇床中进行培养;
  4. 2-5天后通过人工或仪器测定细胞的密度以及活率,如果细胞密度达到1.0×106cells/mL,活率85%以上则可进行传代培养;
  5. 如果细胞密度低于1.0×106cells/mL,则建议对细胞进行离心(100g,5min),然后重悬于20-30mL 的新鲜培养基中使得细胞密度为0.6×106cells/mL 左右,并继续培养至细胞正常生长则可进行传代培养。
细胞转染:
SMM 293-T1培养基中,用Sinofection®转染试剂(货号STF01),可以实现 HEK293 细胞的高转染效率。具体细节可以参考Sinofection® 转染试剂说明书或者登陆我们的官网(old.sinobiological.cn)进行查阅。
细胞驯化:
悬浮的HEK293 cells几乎不用驯化就可直接适应SMM 293-T1培养基。如果直接更换培养基失败则推荐下面两种方式来驯化HEK293细胞使其适应SMM 293-T1培养基:1)直接驯化;2)逐步驯化。
1)直接驯化:
  1. 将培养在加有5~10%血清的传统培养基或其他无血清培养基里的细胞,直接稀释传代到SMM 293-T1培养基中,细胞密度控制在0.3~0.4×106cells/mL;
  2. 将细胞置于37 ℃,5% CO2,转速为110~175 rpm的恒温摇床中进行培养;
  3. 4~6天后对细胞培养液进行稀释(或者离心更换上清),保持稀释(或者离心)后细胞密度为0.3~0.4×106 cells/mL;
  4. 经过在100%的 SMM 293-T1培养基中的几次传代培养,传代后4~6天细胞的密度可以达到2~3×106 cells/mL,细胞活率大于90%。这说明细胞已经完全适应了SMM 293-T1培养基,之后进行细胞的传代培养时,细胞的起始密度可以降到0.2~0.3×106/ml左右。
注意:如果直接驯化效果欠佳,可采用逐步驯化的方法。
2)逐步驯化:
  1. 将培养在加有5~10%血清的传统培养基或其他无血清培养基里的细胞,直接稀释传代到SMM 293-T1培养基中,细胞密度控制在0.3~0.4×106cells/mL,原培养基与SMM 293-T1培养基的比例为75:25;
  2. 将细胞置于37℃,5%CO2,转速为110-175rpm的恒温摇床中进行培养;
  3. 4~6天后进行传代,如果细胞生长状态良好,且活率>90% 则传代时原培养基与SMM 293-T1培养基的比例为50:50,细胞密度仍控制在0.3~0.4×106cells/mL。如细胞生长慢,可离心上清,留20%原培养基,加入80% 的新鲜SMM 293-T1培养基继续培养;
  4. 重复步骤3逐步增加SMM 293-T1培养基所占的比例(原培养基与SMM 293-T1培养基的比例为25:75至10:90)直到100%的SMM 293-T1培养基;
  5. 经过在100%的 SMM 293-T1培养基中的几次传代培养,传代后4~6天细胞的密度可以达到2~3×106cells/mL,细胞活率大于90%。这说明细胞已经完全适应了SMM 293-T1培养基,之后进行细胞的传代培养时,细胞的起始密度可以降到0.2~0.3×106cells/mL。
注意:一般细胞驯化过程中,前三代细胞的状态可能不是很好,但一般从第四代开始状态会有改善。
细胞冻存:
  1. 冻存细胞时,要选择处于对数生长期同时细胞活率在90%以上的 HEK293 cells ;
  2. 事先计算好冻存的细胞管数和所用的培养基的体积;
  3. 制备细胞冻存液:50% 的新鲜SMM 293-T1培养基+50% 条件SMM 293-T1培养基,混合之后再加入7.5% DMSO,存放在4℃,一般为当天用当天制备;
  4. 对细胞样品进行计数;
  5. 取样计数,以100 g,3~5 min的条件离心收集细胞,然后用冻存培养基( 4 ℃ )重悬细胞,使得细胞密度为 5~10×106 cells/mL;
  6. 取样计数,调整细胞密度;迅速分装细胞到无菌的冻存管中,一般2 mL 的冻存管放1~1.5 mL,贴好标签,密封;
  7. 将细胞冻存管放到程序降温冻存盒(注意填充异丙醇,4 ℃预冷)中,置于-80℃ 冰箱(每分钟下降1 ℃),过夜存放后将细胞一如液氮罐中进行保存。
已发表文献:

Peilong Lu, Xiao-chen Bai, DanMa, Tian Xie. et al. Three-dimensional structure of human γ-secretase. Nature. 2014 Jun 29. doi:10.1038/nature13567.

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Catalog:M293T-1
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